酵母双杂交原理: 在酵母双杂交系统中,编码诱饵蛋白和靶蛋白的基因分别克隆进OmicsLink™ pBD和OmicsLink™ pAD 载体,这样使得待研蛋白可融合表达GAL4 DNA 结合结构域和GAL4激活结构域。以上的两种载体共转化酵母细胞。如果诱饵蛋白和靶蛋白能够相互作用,那么GAL4 DNA 结合结构域和GAL4激活结构域就会相互作用,从而激活lacZ报道基因的表达。所以我们可以通过转化的酵母的表型来确定诱饵蛋白和靶蛋白是否有相互作用。
特点与优点: 酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因。酵母双杂交系统检测蛋白之间的相互作用具有以下优点: ⑴ 作用信号是在融合基因表达后, 在细胞内重建转录因子的作用而给出的, 省去了纯化蛋白质的繁琐步骤。 ⑵ 检测在活细胞内进行, 可以在一定程度上代表细胞内的真实情况。 ⑶ 检测的结果可以是基因表达产物的积累效应, 因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用。 ⑷ 酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库, 能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白。例如已报道成功分析了RAP1与RIF1ii、P21cip1与CDK2iii、p16与CDK4iv等之间的相互作用。
(5) 可以用来比对病变组织更快的找到突变基因或者导致变异的蛋白,更快的找到攻克方向。 (6) 以用作大规模的蛋白筛选,在较短时间内对找到某些药物对相关组织主要的作用蛋白,对于药物的修饰和改进明确方向。 (7) 可以反复使用,培养快捷,适合大规模筛选使用。
1 酵母双杂交cDNA文库构建:
技术服务内容:
总RNA提取、纯化―mRNA分离―cDNA制备―cDNA连接AD载体-连接产物转化大肠杆菌-cDNA文库效价测定-cDNA文库扩增-cDNA文库扩增后的质粒DNA纯化-纯化后cDNA文库质量的鉴定(如PCR和酶切鉴定等方法)等
合作方式:
为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供cDNA 或组织、细胞。
服务完成时提供详细的实验报告以及两种形式的文库:
A 该文库转化的大肠杆菌甘油冻存管
B 对转化到宿主菌中的文库进行进一步扩增,获得扩增后的文库大肠杆菌冻存管
周期:2个月。
2 酵母双杂交技术筛选相互作用蛋白:
技术服务内容:
载体构建和测序;自激活检验;酵母双杂交和阳性克隆的鉴定,测序,信息学分析。
合作方式:
为客户对指定的基因文库进行酵母双杂交筛选。由客户提供诱饵基因和基因文库。
筛选完成后向客户提供详细的筛选报告和阳性克隆实物。
周期:3个月。
3 酵母双杂交技术检测指定基因对之间的相互作用:
技术服务内容:
把X基因和Y基因分别转入AD、BD载体,共转化酵母,通过酵母双杂交系统检测他们之间的相互作用。
合作方式:
为客户对指定的2个或多个基因之间进行酵母双杂交实验,验证其相互作用。由客户提供基因克隆。
实验完成后向客户提供详细的实验报告和相互作用阳性的酵母共转化菌株。
周期:35个工作日
即将引进膜蛋白酵母双杂交系统,敬请期待
适用于整合膜蛋白质、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究
由于传统的酵母双杂交系统适用于核内蛋白质间相互作用的研究,存在一定的局限性,在一定程度上限制了它的使用范围,不能够完全满足科研的需求,因此需要改进,实现突破。
全新的膜蛋白杂交系统突破了传统酵母双杂交的局限,扩大了酵母双杂交的应用范围,因此有望满足更多客户的需求。玉华长期合作客户有:
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美国CD公司 |
2 |
香港城市大学 |
3 |
中科院上海生化细胞所 |
4 |
中国科学院细胞生物学研究所 |
5 |
中国科学院神经学研究所 |
6 |
北京中科院动物研究所 |
7 |
浙江大学 |
8 |
武汉大学 |
9 |
复旦大学遗传实验室 |
10 |
北京解放军总医院 |
11 |
重庆大学 |
12 |
苏州大学 |
13 |
郑州大学 |
14 |
浙江工业大学 |
15 |
暨南大学 |
16 |
瑞金医院 |
17 |
重庆西南大学 |
18 |
福建农林大学 |
19 |
福建血液病防治所 |
20 |
上海第二军医大学 |
21 |
浙江师范大学 |
22 |
上海长海医院 |
23 |
上海博阳生物有限公司 |
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常州制药厂有限公司 |
25 |
上海市消化疾病研究所 |
26 |
福建农林大学 |
27 |
云南中医学院 |
28 |
上海交通大学 |
29 |
上海优益绩贸易有限公司 |
30 |
上海检疫局出入境管理所 |
31 |
大连医科大学 |
32 |
华山医院 |
33 |
第二军医大学 |
34 |
重庆第三军医大学 |
35 |
广州中山大学附属第一医院 |
36 |
西安交大附属第一医院 | |